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猪瘟正向血凝抗体检测试剂盒

一、 试验材料

1、 6孔110°微量血凝板。

2、 10-100微升可调微量移液器

3、 塑料咀

4、 猪瘟正向间接血凝抗原(猪瘟正向血凝诊断液),每瓶5毫升,可检测血清25-30头份。

5、 阳性对照血清,每瓶0.5毫升;阴性对照血清每瓶0.5毫升

6、 稀释液每瓶50毫升

7、 待检血清每份0.2-0.5毫升(56℃水浴灭活30分钟)

二、 操作步骤

1、 检测前,应将试剂盒从冰箱中拿出回温到室温,并且将抗原液摇匀。

2、 稀释待检血清:在血凝板上的第一孔――第六孔各加稀释液50ul,待检血清加入第一孔,混匀后从中取出50ul加入第二孔,依此类推直至第六孔混匀后丢弃50ul,从第一孔――第六孔的血清稀释度依次为1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64。

3、 稀释阴性血清和阳性血清:在血凝板上的*1排*孔加稀释液50ul,取阴性血清50ul混匀

后取出50ul丢弃。此孔即为阴性血清对照孔。

在血凝板上的*2排*孔加稀释液50ul,第2孔――第7孔各加稀释液50ul 。吸取阳性血清50ul,加入*孔混匀并从中取出50ul加入第2孔……直到第7孔混匀并丢弃50ul。第七孔的阳性血清稀释度则为1:512。

4、 在血凝板上的*排第8孔加稀释液50ul即为稀释液对照孔。

5、 滴加抗原:*排1-8孔和对照孔各加血凝抗原25ul立即置微量震荡器上震荡1分钟,或用手

摇匀。室温下静置2-3小时后判断结果,也可于次日判断结果。

6、 判定方法和标准:先观察阴性血清对照好和稀释液对照孔,红血球应全部沉入孔底,无凝集现象(-)或呈阳性(+)的轻度凝集为合格;阳性血清对照应呈(+++)凝集为合格。

在以上3孔对照合格的情况下,观察待检血清各孔的凝集程度,以呈“++”凝集的待检血清*稀释度

为血凝效价(血凝价)。血清的血凝价达到1:16为免疫合格。

“-”表示红血球100%沉于孔底,完全不凝集

“+”表示约有25%的红血球发生凝集

“++”表示50%红血球出现凝集

“+++”表示75%红血球凝集

“++++”表示90-100%红血球凝集

7、 注意事项

(1) 勿用90°或130°血凝板,以免误判。

(2) 污染严重或溶血严重的血清样品不宜检测。

(3) 冻干血凝抗原,必须加稀释液浸泡7-10天,方可使用,否则易发生自凝现象。

(4) 用过的血凝板,应及时冲洗干净,勿用毛刷或其它硬物刷洗板孔,以免影响孔内光洁度。

(5) 使用血凝抗原时,必须充分摇匀,瓶底应无血球沉积。

(6) 液体血凝抗原4-8℃贮存,有效期4个月。

(7) 如来不及判定结果或静置2小时结果不清晰,也可放置第二天判定。

(8) 每次检测,只设阴性、阳性血清和稀释液对照各1孔。

(9) 稀释不同的试验要素时,必须更换塑料咀。

(10) 血凝板洗净后,自然干燥,可重复使用。